引用本文
宋博, 孙玉坤, 田洁, 宋旸, 唐哲, 姚辉, 王海鹏. HPLC法同时测定五味子糖浆中五味子酯甲和五味子甲素的含量[J]. 武警医学, 2018,29(3): 267-269
SONG Bo, SUN Yukun, TIAN Jie, SONG Yang, TANG Zhe, YAO Hui, WANG Haipeng. Simultaneous determination of schisantherin and deoxyschizandrin in Wuweizi syrup by HPLC[J]. Medical Journal of the Chinese People's Armed Police Forces, 2018,29(3): 267-269  
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HPLC法同时测定五味子糖浆中五味子酯甲和五味子甲素的含量
宋博1, 孙玉坤1, 田洁2, 宋旸3, 唐哲1, 姚辉1, 王海鹏1
1.110034 沈阳,武警辽宁总队医院药剂科
2.063000,唐山市中医医院药学部
3.110031 沈阳,解放军93321部队卫生队
通讯作者：孙玉坤,E-mail:wjsunyk@163.com

作者简介:宋 博,学士,主管药师。

收稿日期: 2017-11-14
摘要

目的 建立HPLC法测定五味子糖浆中五味子酯甲和五味子甲素含量的方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Eclipse Plus C18柱(3.5 μm,4.6×100 mm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(60∶40)进行梯度洗脱;流速1.2 ml/min;检测波长254 nm;柱温26 ℃。结果 五味子酯甲的进样量在1.04~26.23μg范围内( r=0.9991)、五味子甲素的进样量在1.05~26.51 μg范围内( r=0.9995)线性关系良好,五味子酯甲、五味子甲素的平均回收率分别为99.58% (RSD=1.72%, n=6)和99.95% (RSD=1.29%, n=6)。结论 本方法简便快捷,重现性好,结果准确,适用于五味子糖浆的含量测定。

关键词: 五味子糖浆; 五味子酯甲; 五味子甲素; HPLC; 含量测定
中图分类号:R927
Simultaneous determination of schisantherin and deoxyschizandrin in Wuweizi syrup by HPLC
SONG Bo1, SUN Yukun1, TIAN Jie2, SONG Yang3, TANG Zhe1, YAO Hui1, WANG Haipeng1
1.Liaoning Provincial Crops Hospital,Chinese People’s Armed Police Force,Shenyang 110034,China.
2. Chinese Medicine Hospital of Tangshan,Tangshan 063000, China.
3.Medical Team, Troop 93321 of PLA,Shenyang 10031, China
Abstract

Objective To establish a method for the determination of schisantherin and deoxyschizandrin in Wuweizi syrup.Methods The high performance liquid chromatography method was used and the separation was performed on an Eclipse Plus C18(3.5 μm,4.6×100 mm)with acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution(60∶40) as the mobile phase with gradient elution at a flow rate of 1.2 ml/min. The detection wavelength was set at 254 nm, and the column temperature was 26 ℃.Results The linear range of schisantherin and deoxyschizandrin was 1.04-26.23 μg ( r=0.9991) and 1.05-26.51 μg ( r=0.9995)respectively. The average recovery was 99.58% ( RSD=1.72%, n=6) and 99.95% ( RSD=1.29%, n=6), respectively.Conclusions The established HPLC method is proved to be simple, reproducible, precise and suitable for the content determination of Wuweizi syrup.

Keyword: Wuweizi syrup; schisantherin; deoxyschizandrin; HPLC; content determination

五味子糖浆收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第2册[1]。五味子是华中五味子或木兰科植物五味子的干燥成熟果实。习惯称前者为“ 南五味子” , 后者为“ 北五味子” 。性酸、甘、温, 归肺、心、肾经, 具有收敛固涩, 益气生津, 补肾宁心之功效[2]。木脂素为五味子的主要活性成分, 同时还含有挥发油和多糖等成分。据相关研究报道, 五味子多糖具有调节免疫、抗病毒、保肝、抗肿瘤、抗衰老等作用[3, 4, 5]。文献[6, 7, 8, 9]多报道单独检测五味子甲素或五味子醇甲在五味子糖浆中的含量, 并以此作为五味子糖浆的质控标准。本实验在既有方法的基础上, 通过反复摸索, 成功运用了HPLC法同时测定五味子糖浆中五味子酯甲和五味子甲素的含量, 为较好地检测该产品质量提供了一条更为精准、可操作的实验方法。

1 仪器与试剂
1.1 仪器

美国赛默飞世尔-Accela高效液相色谱仪, 四元泵系统, 紫外检测器为SPD-10B型; 北京卓川WA.167-uw实验室超纯净水器; BK-4799JC型数控超声波清洗器(上海越众); 750G多功能粉碎机(上海尚层工贸有限公司); JA1005电子分析天平(上海霈振仪器设备有限公司, 万分之一); R-300型旋转蒸发仪(BUCHI公司); 2020AB恒温干燥箱(阿斯卡利)。

1.2 药品与试剂

对照品均来自上海樊克生物科技有限公司, 分别为五味子酯甲(47529-51-3) 对照品和五味子甲素(83083-25-6)对照品。五味子糖浆检测样品均为药店销售的产品(生产厂家一致, 批号分别为国药准字Z20151682、20152751、20152019、20151437、20162083、20162431)。甲醇为AR分析纯(南京化学试剂股份有限公司); 乙腈(≥ 99.9%, SIGMA-ALDRICH); 超纯水由EasyQ-A20型超纯水仪制备(上海技舟化工科技有限公司)。

2 方法与结果
2.1 色谱条件

选用Eclipse Plus C18柱(3.5 μ m, 4.6× 100 mm)为色谱柱; 流动相(梯度洗脱液)为乙腈-0.1%磷酸水溶液(60∶ 40); 检测波长为254 nm; 柱进样量为20 μ l; 温控制在26 ℃; 流速为1.2 ml/min。

2.2 复合对照品溶液制备

精密称定0.0107 g五味子酯甲和0.0104 g五味子甲素, 置于10 ml 的容量瓶中, 加甲醇溶解至刻度, 摇匀后既得复合对照品溶液(五味子酯甲1.07 mg/min, 五味子甲素1.04 mg/ml)。

2.3 供试品溶液制备

精密吸取10 ml五味子糖浆溶液, 加水稀释至20 ml, 每次以30 ml氯仿作为提取液, 共提取3次, 将收集到的氯仿溶液蒸发后得残渣, 移至容量瓶(10 ml)中, 再加入甲醇溶解并定容至刻度, 混合均匀后经微孔滤膜滤过, 获得的滤过液即为本实验的供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备

取单糖浆根据五味子糖浆的配方和供试品溶液的制备方法制备不含五味子的阴性样品对照溶。将以上制得的三种试液各进样20 μ l, 按上述色谱条件检测并记录色谱图, 结果如图1所示, 阴性样品无杂质干扰。

图1 HPLC色谱图
A.复合对照品; B.供试品; C.五味子阴性样品; 1. 五味子酯甲; 2. 五味子甲素

2.5 线性关系的考察

精密吸取复合对照品溶液(2、4、8、15、20、25、30 μ l)依次进样, 按上述色谱条件测定并记录峰面积, 以进样量对峰面积制作标准曲线, 得出五味子酯甲的回归方程为Y=2× 106X-801006, r=0.9993, 其在1.04~26.23 μ g范围内具有良好的线性关系; 五味子甲素的回归方程为Y=2× 106X-214367, r=0.9995, 其在1.05~26.51 μ g范围内具有良好的线性关系。

2.6 仪器精密度试验

精密吸取复合对照品溶液, 按上述色谱条件, 连续进样6次, 每次20 μ l, 测得五味子酯甲、五味子甲素峰面积的RSD值分别为1.09%和1.15%, 可满足实验要求。

2.7 稳定性试验

吸取五味子糖浆(批号:20151682)6份, 按供试品溶液制备方法制备溶液, 按上述色谱条件, 依次于0、2、4、6、8、12、24 h各进样20 μ l, 并记录峰面积, 分别得出五味子酯甲、五味子甲素的RSD值为1.12%和0.96%, 说明供试品溶液在制备后24 h内稳定性良好。

2.8 重复性试验

吸取五味子糖浆(批号:20151682)6份, 按供试品溶液制备方法制备溶液, 按上述色谱条件, 每次各进样20 μ l, 依次测定, 结果为五味子酯甲质量分数的RSD值为1.10%, 五味子甲素质量分数的RSD值为1.01%。

2.9 加样回收率试验

吸取五味子糖浆(批号:20151682, 含量已知)6份, 每份10 ml, 分别置于50 ml量瓶中, 将五味子酯甲和五味子甲素对照品精密称取适量加入容量瓶, 按上述“ 2.2” 项方法处理, 制得供试品溶液。分别测得五味子酯甲和五味子甲素的平均回收率(n=6)为99.58%和99.95%, RSD值为1.72%和1.29%(表1)。

表1 五味子两种指标的加样回收率(n=6)
2.10 样品的测定

量取6批次五味子糖浆样品适量, 依照“ 2.2” 项下方法处理并制备供试品溶液, 按上述色谱条件下各进样20 μ l测得峰面积, 计算五味子酯甲和五味子甲素的含量(表2)。

表2 五味子样品含量测定(mg/ml; n=6)
3 讨 论

本研究分别考察了几种提取方式, 发现采用氯仿提取3次(每次20 ml), 合并氯仿液, 为提取五味子酯甲和五味子甲素的最优化方法。

3.1 流动相系统选择

以往文献报道使用甲醇-水为流动相居多, 也有使用甲醇-0.1%磷酸、乙腈-水作为流动相的, 本研究通过应用乙腈-0.1%磷酸作为流动相, 与以上条件的对比发现五味子糖浆中的两种指标分离效果与流动相的酸碱度存在相关性, 研究发现应用乙腈-0.1%磷酸作为流动相使得两种待测成分与另外不相关物质达到理想的分离度和峰形。通过实验发现, 根据五味子酯甲和五味子甲素极性偏小的特点, 可通过快速增加有机相的比例使两种成分达到较理想分离效果。

3.2 检测波长的优化

本研究在上述液相色谱条件下, 通过应用紫外可见吸收检测器对供试品溶液和对照品溶液光谱扫描, 范围为200~400 nm并绘制三维吸收图谱, 结果在254 nm处两种检测成分均有较大吸收强度, 而其他杂质峰在此波长处无明显吸收。

综上所述, 本研究通过对样品的提取方法, 流动相系统的选择, 及检测波长的优化, 成功完成了同时对五味子糖浆中的两种主要成分(五味子酯甲和五味子甲素)的含量检测, 此方法具有稳定性好、可操作性强等特点, 以期为五味子糖浆的质量检测提供一条新的途径。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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