引用本文
黄艳萍, 祝峰. 不同温度及保存时间对糖化血红蛋白检测结果的影响[J]. 青海石油, 2018,29(9): 868-870.
HUANG Yanping, ZHU Feng. Effect of specimen disposal on detection of glycosylated hemoglobin by OLIMPO specific protein analyzer[J]. Qinghai Petroleum, 2018,29(9): 868-870.
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不同温度及保存时间对糖化血红蛋白检测结果的影响
黄艳萍, 祝峰
225003 扬州,武警江苏总队医院检验科
通讯作者: 祝 峰,E-mail: zfwjjszd@163.com

作者简介:黄艳萍,本科学历,主管检验师。

收稿日期: 2018-05-20
摘要

目的 探讨标本在不同温度及不同保存时间的条件下,对糖化血红蛋白(HbA1c)检测结果的影响。方法 取10例患者抗凝新鲜全血标本进行预处理(溶血处理),在室温下分装成6组,每组10个标本。A组立即检测,B、C、D、E、F组分别在分装后1、2、3、4、5 h检测。取5例全血标本分别充分混匀后,分4组保存,每组5个标本。A1组在室温(18~22 ℃)、B1组冷藏(2~8 ℃)、C1组冷冻(-18~-20 ℃)、 D1组低温冷冻(-80 ℃)条件下保存不同时间后,分别用OLIMPO进行检测。以低温冷冻组测定结果为标准,每个标本的HbA1c测定结果都在低温冷冻组结果的x̅±3 s范围内为可接受结果。结果 溶血后不同时间HbA1c检测结果:A组(7.98±1.61)%;B组(7.97±1.61)%;C组(7.95±1.60)%;D组(7.94±1.61)%;E组(7.77±1.61)%;F组(7.46±1.57)%。与A组比较,F组差异有统计学意义( t=1.57, P<0.05)。要使OLIMPO检测HbA1c结果保持稳定,则标本的保存时间分别为:室温2 d,冷藏15 d,冷冻3 d;低温冷冻半年以上。结论 OLIMPO检测HbA1c时,不同处理条件下,HbA1c结果的稳定性差异较大。样本溶血处理后4 h内完成检测,结果较准确;如果全血标本需要保存较长的时间,则在2~8 ℃冷藏和-80 ℃条件下保存效果较好。

关键词: 溶血时间; 保存温度; 保存时间; HbA1c; OLIMPO 特定蛋白分析仪
中图分类号:R446.1
Effect of specimen disposal on detection of glycosylated hemoglobin by OLIMPO specific protein analyzer
HUANG Yanping, ZHU Feng
Department of Laboratory Medicine, Jiangsu Provincial Corps Hospital of Chinese People’s Armed Police Force, Yangzhou 225002, China
Abstract

Objective To explore the effect of sample hemolysis time and preservation conditions on the detection of glycosylated hemoglobin (HbA1c) by OLIMPO.Methods 1.Anticoagulant samples of fresh whole blood were taken from ten patients to be preprocessed (hemolyzed). Sixty samples of 150 μl each were collected and equally divided into 6 groups at room temperature. Group A was immediately detected, while groups B, C, D, E and F were detected 1, 2, 3, 4 and 5 hours later, respectively. 2. After 5 samples of whole blood were mixed properly, they were divided into 4 groups with 5 samples in each. Group A1 was stored at room temperature (18-22 ℃), group B1 was refrigerated (2-8 ℃), group C1 cryopreserved (-18--20 ℃) , and group D1 was cryopreserved at a low temperature (below -80 ℃).The results of D1 were taken as the standard to detect the quality of each group with OLIMPO. The HbA1c results of each specimen were regarded as acceptable if they were within the range of ±3 compared with the results of D1.Results 1.HbA1c results at different time points after hemolysis were (7.98±1.61)% in group A, (7.97±1.61)% in group B, (7.95±1.60)% in group C, (7.94±1.61)% in group D, (7.77±1.61)% in group E and (7.46±1.57)% in group F. There was statistically significant difference between group A and group F ( t=1.57, P<0.05). 2. In order to keep HbA1c results stable during OLIMPO test, the storage time of samples was 2D at room temperature, 15 d for cold storage, 3D for cryopreservation and more than half a year for cryopreservation at a low temperature.Conclusions When HbA1c is detected with OLIMPO, the stability varies considerably under different processing conditions. The results are relatively accurate within 4 hours after sample hemolysis. If the whole blood sample specimen needs to be stored for a longer time (for scientific research or re examination), better preservation can be achieved at 2-8 ℃ and -80 ℃.

Keyword: hemolysis time; storage temperature; storage time; glycosylated hemoglobin; OLIMPO protein analyzer

HbA1c作为糖尿病血糖控制、干预治疗、疗效观察及并发症预测风险的有效指标[1], 检测结果的准确性至关重要。近年来, HbA1c检测方法和标准化已逐渐完善。实际工作中, 笔者发现HbA1c的检测不仅要依靠标准化操作[2], 标本的溶血时间、保存条件也起着重要的作用[3]。文献[4]发现反复冻融对检测结果没有显著影响。不同仪器对标本溶血时间、保存温度、保存时间有不同的要求, 本研究以OLIMPO特定蛋白分析仪为研究对象, 探讨预处理(溶血处理)标本不同溶血时间, 未经预处理的标本在不同温度及不同保存时间的条件下, 测定结果的稳定性。

1 材料与方法
1.1 标本采集及保存

选取我院门诊糖尿病患者10例, 各抽取EDTA-k2抗凝全血2 ml。均无脂血、溶血、凝血及血红蛋白变异体。每份标本充分混匀后立即溶血处理(取5 μ l全血加入900 μ l溶血液)后, 分装成6份, 每份150 μ l。在室温下分装成6组, 每组共10个标本。A组立即检测, B、C、D、E、F组分别在分装后1、2、3、4、5 h检测。同时, 取上述新鲜标本5例各2 ml充分混匀后, 每管分装0.5 ml, 共20管, 分4组保存。A1组室温(18~22 ℃)、B1组冷藏(2~8 ℃)、C1组冷冻(-18~-20 ℃) 、D1组低温冷冻(-80 ℃以下)下保存, 在1、2、3、8、10、15、16、40、80、180 d进行检测。

1.2 试剂与仪器

OLIMPO特定蛋白分析仪及配套试剂(包括抗血清、溶血液和乳胶)、HbA1c校准品及质控品。OLIMPO特定蛋白分析仪先进行定标, 然后将室内质控与待测标本同时上机检测。

1.3 评价标准

根据美国国家HbA1c标准化计划(NGSP)规定:HbA1c测定结果以-70 ℃或更低温度 x̅± 3s作为可接受范围, 检测结果在 x̅± 3s范围内为结果稳定[5]。其他保存温度保存时间的检测结果与低温冷冻组 x̅± 3s进行比较, 在此范围内为可接受结果。

1.4 统计学处理

采用SPSS22.0 统计软件, 不同溶血时间组与立即测定组的比较采用t检验, 以P< 0.05为差异有统计学意义。

2 结 果
2.1 HbA1c检测结果

溶血后不同时间HbA1c检测结果:A组(7.98± 1.61)%; B组(7.97± 1.61)%; C组(7.95± 1.60)%; D组(7.94± 1.61)%; E组(7.77± 1.61)%; F组(7.46± 1.57)%。与A组比较, F组差异有统计学意义(t=1.57, P< 0.05), 其他各组与A组比较差异无统计学意义。表明预处理标本随着溶血时间的延长, 检测结果逐渐降低。

2.2 -80 ℃以下保存标本HbA1c的检测结果

-80 ℃条件下保存标本, HbA1c检测结果的稳定性好。标本1~5可接受范围分别是6.45~6.73, 6.77~7.08, 5.05~5.39, 7.20~7.47, 8.27~8.59, 见表1。

表1 -80 ℃以下保存不同时间标本HbA1c的检测结果(%)
2.3 室温、冷冻条件下不同时间HbA1c结果

室温保存标本, 前2 d 5例标本检测结果均在可接受范围内, 第3天有2例不在可接受范围内, 因此OLIMP检测糖化血红蛋白室温下保存标本的结果可稳定2 d。冷冻保存标本, 前3 d 5例标本检测结果均在可接受范围内, 第4天有2例不在可接受范围内, 因此OLIMP检测糖化血红蛋白冷冻保存标本的结果可稳定3 d。见表2。

表2 室温、冷冻条件下5例保存标本不同时间HbA1c检测结果(%)
2.4 冷藏条件下不同时间HbA1c结果

冷藏(2~8 ℃)保存标本, 前15 d 5例标本检测结果均在可接受范围内, 第16天有2例不在可接受范围内, 因此OLIMP检测糖化血红蛋白冷藏保存标本的结果可稳定15 d。

表3 冷藏保存标本不同时间HbA1c检测结果(%)
3 讨 论

目前, 我国使用的糖尿病诊断标准是1999年世界卫生组织(WHO)公布的基于血糖水平的诊断标准[6], 葡萄糖代谢水平受到进食、应激等多种因素的影响。中老年糖尿病患者普遍存在血脂代谢紊乱、各器官功能下降等现象, 血糖水平波动较大[7, 8], 对糖尿病治疗效果产生较大的影响。美国糖尿病协会(ADA)于2010年首次正式批准HbA1c作为糖尿病诊断标准之一[9], 其诊断界值为≥ 6.5%。目前HbA1c检测已高度标准化, 不需禁食, 检测便利且较血糖结果更为稳定。ADA将HbA1c水平为5.7%~6.4%的患者归类为“ 糖尿病高危人群” , 用以取代“ 糖尿病前期诊断” 。 在我国, 虽然反对HbA1c作为糖尿病诊断标准的观点依然存在, 但HbA1c仍是糖尿病患者血糖控制的金标准[10, 11]。HbA1c的形成是不可逆的, 其浓度与红细胞寿命和该时期内血糖的平均浓度有关, 不受血浆葡萄糖浓度波动而变化, 也不受运动或食物的影响。HbA1c可反映过去6~8周的平均血糖浓度, 为评估血糖的控制情况提供了可靠的实验室指标。因此我们在实际工作中要高度重视HbA1c检测结果的准确性, 如需备检, 应充分考虑标本预处理的溶血时间、保存温度、保存时间等因素对结果的影响。

本研究发现, HbA1c预处理标本检测结果室温下可稳定4 h; OLIMPO检测HbA1c结果标本保存的时间分别为, 室温2 d, 冷藏15 d, 冷冻3 d, 低温冷冻稳定半年以上。一般认为保存温度越低, 结果稳定时间越长, 但冷冻组比冷藏组结果的稳定时间要短得多, 可能由于冷冻温度不够低, 导致血红蛋白在冰冻过程中发生轻微的蛋白质变性, 再次复融时造成蛋白质结构改变, 致使结果的稳定性降低。而-80 ℃是一个极冻的过程, 不会造成血红蛋白的变性, 复融后依然保持蛋白质的活性。另外, 血红蛋白变异体、铁、维生素B12、叶酸缺乏引起贫血等因素可导致HbA1c测定结果出现假性升高或降低[12], 不能真实反映患者的平均血糖水平。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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