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组织工程延长后根神经节细胞移植修复脊髓损伤大鼠的长期存活观察 |
佟怀宇;许百男 |
解放军总医院神经外科,北京,100853 |
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Long-term survival of tissue engineering elongated dorsal root ganglion cells implanted into rat spinal cord lesion |
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摘要 目的 探索采用组织工程技术,构建由活性轴突形成的较长神经组织移植物,用来修复脊髓损伤.方法 (1)移植物制备:从8~10个15 d胚胎鼠取脊髓后根神经节(doral root ganglion,DRG)细胞,在普通神经细胞培养环境中培养5 d,然后用特制的延长装置将神经节细胞机械拉长,1 mm/d, 2 d,然后增至2 mm/d, 3 d,再减至1 mm/d, 2 d,培养获得10 mm长轴突105~106根,用水凝胶包裹构成神经组织准备移植,移植前用BDA标记轴突及其细胞体.(2)动物模型:成年雌性Sprague-Dawley大鼠225~250 g,40 mg/kg苯巴比妥腹腔注射麻醉,行T9~11双开门手术切除该节段右侧半脊髓约10 mm,同时移植构建好的移植物或单纯移植水凝胶为对照,严密缝合硬膜后行扩大椎板成形术,2个月后处死取标本.(3)免疫组化:纵向连续冷冻切片20 μm/张,行anti-NF200、anti-CGRP(DRG特异)、anti-BDA免疫组化染色.结果 2个月后单纯移植水凝胶者,没有宿主轴突长入水凝胶.移植DRG者,anti-NF200、anti-CGRP、anti-BDA染色均证实2个月后移植细胞存活.结论 组织工程延长后根神经节细胞移植物可以存活达2个月,或有可能在较长的脊髓损伤部位建立上下联系.
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关键词 :
组织工程,
后根神经节,
脊髓损伤,
移植
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收稿日期: 2010-01-10
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